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技術文章

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自身免疫試劑盒的具體注意事項
更新時間:2013-09-02 點擊次數(shù):1780

 自身免疫試劑盒原理: 

當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質x的抗體免疫沉淀x,那么與x在體內(nèi)結合的蛋白質y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內(nèi)結合;也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

 自身免疫試劑盒注意的問題:

(1)細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內(nèi)存在的所有蛋白質-蛋白質相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑。
(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。
(3)使用對照抗體:
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