一、核糖體的定義與結構
核糖體是細胞中負責蛋白質合成的分子機器，由核糖體RNA（rRNA）和多種蛋白質組裝而成。
分類：
原核生物核糖體（70S）：由30S小亞基（16S rRNA + 21種蛋白）和50S大亞基（23S/5S rRNA + 34種蛋白）組成。
真核生物核糖體（80S）：包含40S小亞基（18S rRNA）和60S大亞基（28S/5.8S/5S rRNA）。
結構特征：
功能活性位點：包括解碼中心（識別mRNA密碼子）、肽基轉移酶中心（催化肽鍵形成）及新生肽鏈通道。
動態組裝：核糖體亞基在細胞質中獨立存在，翻譯時結合成完整顆粒，翻譯結束后解離循環利用。
二、核糖體的核心功能
蛋白質合成的分子機制
翻譯過程：
起始：小亞基結合mRNA起始密碼子（AUG），攜帶甲硫氨酸的tRNA進入P位。
延伸：tRNA依次進位（A位）、肽鍵形成（P位→A位）、移位（核糖體沿mRNA移動）。
終止：釋放因子識別終止密碼子，新生肽鏈釋放。
能量驅動：依賴GTP水解（如EF-Tu、EF-G因子）和ATP供能。
翻譯調控與疾病關聯
質量控制：核糖體停滯或錯誤翻譯觸發mRNA監視系統（如No-Go Decay）。
癌癥與罕見病：核糖體蛋白（如RPS19）突變導致先天性骨髓衰竭（Diamond-Blackfan貧血），核糖體生物合成異常與MYC驅動的腫瘤密切相關。
三、ELISA實驗解析：核糖體研究的實驗利器
酶聯免疫吸附測定（ELISA）是一種高靈敏度、高通量的蛋白質檢測技術，廣泛應用于核糖體蛋白定量、抗體檢測及疾病標志物分析。
實驗流程（以檢測核糖體蛋白為例）：
樣本準備：
細胞裂解液（含核糖體蛋白）或血清（含抗核糖體抗體）。
常用裂解緩沖液：RIPA（含蛋白酶抑制劑）。
實驗類型選擇：
直接法：包被抗原→加入酶標一抗→顯色定量（適用于已知單一抗原）。
間接法：包被抗原→加入一抗→酶標二抗→顯色（靈敏度更高，需驗證二抗特異性）。
夾心法（推薦）：包被捕獲抗體→加入樣本→加入檢測抗體→酶標二抗→顯色（特異性最-強，需配對抗體）。
關鍵步驟：
包被：將核糖體蛋白特異性抗體固定于96孔板（4℃過夜）。
封閉：使用BSA或脫脂牛奶封閉非特異性結合位點（37℃ 1小時）。
孵育：依次加入樣本、檢測抗體及酶標二抗（37℃ 1小時/步）。
顯色：TMB底物反應→硫酸終止→450nm波長測OD值。
數據分析：
繪制標準曲線（已知濃度核糖體蛋白梯度稀釋），計算樣本中目標蛋白濃度。
注意事項：避免反復凍融樣本，設置復孔減少誤差，陰性/陽性對照必做。
四、ELISA在核糖體研究中的應用實例
疾病診斷：
自身免疫病：檢測患者血清中抗核糖體抗體（如系統性紅斑狼瘡標志物）。
感染與癌癥：定量EB病毒感染的B細胞中核糖體蛋白表達水平，輔助鼻咽癌早期篩查。
藥物開發：
篩選靶向核糖體的抗生素（如大環內酯類），通過ELISA評估藥物對細菌核糖體蛋白合成的抑制效果。
基礎研究：
解析應激條件下（如缺氧、營養缺乏）核糖體蛋白翻譯效率的動態變化。
